瞬時轉染和穩(wěn)定轉染常見誤區(qū)

　　誤區(qū)一：穩(wěn)定轉染目的基因會整合到染色體，瞬時轉染不會
 

　　這個答案是否定的，因為無論是瞬時轉染還是穩(wěn)定轉染，DNA都會被引入細胞核并以一定的概率隨機地整合到宿主染色體；差別在于，穩(wěn)定轉染所使用的質粒含有抗性基因，隨后通過藥物篩選，將未轉入目的基因的細胞消除，留下的則是成功轉入目的基因的細胞，因此經過一段時間的藥物篩選，留存下來的細胞都是能夠穩(wěn)定傳遞的細胞，稱之為穩(wěn)定轉染；而瞬時轉染由于缺乏藥物壓力篩選，再加上只有少量細胞中有目的基因整合到染色體，因此在傳代過程中，陽性細胞會逐漸減少，導致表達量逐漸降低，最終無法長期穩(wěn)定表達。
 

　　誤區(qū)二：只有慢病毒感染才能構建穩(wěn)轉細胞株
 

　　可以用來進行快速轉染的轉染方法，同樣適用于構建穩(wěn)定的細胞株，例如電穿孔法、化學試劑轉染和慢病毒感染等。只是這三種轉染方法在具體應用上可能會有一些差異。需要特別注意的是，在進行RNA轉染時，由于RNA不需要進入細胞核，因此通常只用于短期轉染表達。
 

　　誤區(qū)三：構建穩(wěn)轉細胞株費時費力，周期長，不確定性高，常規(guī)實驗室不方便構建
 

　　細胞株構建需要通過藥物加壓篩選，與瞬轉相比周期長，但在進行科學研究時，確定了一個長期研究的靶標，后續(xù)都會針對某一基因進行相關實驗，那么這個時候構建穩(wěn)轉細胞株就顯得尤為必要，畢竟細胞株相較于瞬轉來說，最大的優(yōu)點就是表達穩(wěn)定性高，批間差異小，實驗結果可靠性更高。
 

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