Trizol 試劑提取法

原理

Trizol 試劑是一個(gè)包含酚、異硫氰酸胍和 SDS 的單相酸性溶液，其在裂解細(xì)胞的同時(shí)抑制 RNase 的活性，隨后加入氯仿，酚會(huì)大量的溶解在氯仿中。由于 DNA 和 RNA 在酸性酚中的溶解性不同，造成 DNA 分布在下層的氯仿酚溶液中，RNA 則分布在上層的水相中，最后用異丙醇沉淀水相中的 RNA，并用 70% 乙醇洗滌沉淀，這樣就可以得到比較純凈的總 RNA。

材料與儀器

動(dòng)物組織、液氮、Trizol 試劑；

步驟

1、 先在研缽中加入液氮，再將組織剪成小塊在液氮中磨成粉末，用液氮預(yù)冷的藥匙取 50-100 mg 組織粉末加入已盛有 1 ml 的 Trizol 液的 EP 管中（注意組織粉末總體積不能超過(guò)所用 Trizol 體積的 10%），充分混合均勻。

2、室溫放置 5 min，然后加入 200 μl 的氯仿，蓋緊 EP 管并劇烈搖蕩 15 秒鐘。

3、12, 000 rpm 離心 10 min，取上層水相于一新的 EP 管中（千萬(wàn)不要將中間的沉淀層和下層液混入，否則重新離心分離），加入 500 ul 異丙醇，溫和顛倒混勻。室溫放置 10 min，12, 000 rpm 離心 10 min。

4、小心地棄去上清液，加入 1 ml 的 75% 乙醇，渦旋混勻，4℃ 下 12, 000 rpm 離心 5 min。重復(fù)操作一次。

5、棄去上清液（盡量將殘余液體除去），室溫或真空干燥 5-10 min（注意不要干燥過(guò)分，否則會(huì)降低 RNA 的溶解度）。用 30 ul DEPC 處理過(guò)的水將 RNA 溶解，必要時(shí)可 55℃-60℃ 水浴 10 min。RNA 可進(jìn)行 mRNA 分離，或貯存于 70% 乙醇并保存于 -70℃。

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