天根BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞(CB105-02)現(xiàn)貨供應(yīng)

該感受態(tài)細(xì)胞用于以 T7 RNA 聚合酶為表達(dá)系統(tǒng)的高效外源基因的蛋白表達(dá)宿主。T7 噬菌體 RNA 聚合酶基因的表達(dá)受控于λ噬菌體DE3區(qū)的lacUV5啟動子，該區(qū)整合于 BL21 的染色體上。該菌適合于非毒性蛋白的表達(dá)。轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 107 cfu/µg。

本公司生產(chǎn)的BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌BL21(DE3)菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)10’cfu/ug，-90~-65℃保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

操作方法：

1.取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無菌預(yù)冷的離心管中，置于冰浴中。

注意:一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 ，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。

2.向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(100μl的感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和)，輕彈混勻，在冰浴中靜置30 min。

3.將離心管置于42℃水浴中放置60-90 sec，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細(xì)胞冷卻2-3 min，該過程不要搖動離心管。

注意:此步驟也可將離心管置于室溫進(jìn)行，時(shí)間不需十分準(zhǔn)確，夏季或室溫較高時(shí)，可放置5-8 min左右:如果室溫較低，可延長時(shí)間至8-15 min左右。條件允許建議使用42℃℃熱激方法。

4.向每個(gè)離心管中加入900μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素)，混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)45 min(150 rpm)，目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。

5.將離心管內(nèi)容物混勻，吸取100 μl已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收，倒置平板，37C培養(yǎng)12-16 h。

注意:涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板;反之，如轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，可取200-300μI轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預(yù)計(jì)的克隆較少，可通過離心(4000 rpm,2 min)后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。(涂布剩余的菌液可置于4°C保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板)

注意事項(xiàng)：

1.感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-90~-65℃，不可凍融和放置時(shí)間過長，以避免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

2.進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí)，應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件的要求進(jìn)行。

3.為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可以保留部分連接反應(yīng)液，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到zui低。

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