WB、IP、IHC、IF、ChIP、FC六種抗體的區(qū)別是什么？

查詢抗體的時(shí)候，發(fā)現(xiàn)在抗體應(yīng)用欄中，有的抗體適用于WB、IP、IHC、IF、F、CHIP，而有的抗體適用于WB、IHC、IF、F，不適用于IP和CHIP。那么你知道WB、IP、IHC、IF、ChIP、FC六種抗體的區(qū)別是什么？讓我們一起來看看吧！

一、WB

蛋白質(zhì)印跡是生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)中一項(xiàng)常見的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，原理為利用電泳（SDS-PAGE）分離蛋白質(zhì)，接著將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進(jìn)行檢測(cè)的方法，通過分析條帶大小和顯色信號(hào)獲得目標(biāo)蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織樣本表達(dá)情況的信息。由于蛋白質(zhì)進(jìn)行電泳前進(jìn)行加熱變性，破壞了保持蛋白質(zhì)二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)的氫鍵，并使蛋白質(zhì)線性化，需使用識(shí)別線性抗原表位的抗體。因此WB抗體一般采用人工合成多肽作為抗原制備的抗體。

二、IF/IHC

免疫組化是利用標(biāo)記抗體經(jīng)抗原抗體特異性免疫反應(yīng)和化學(xué)/熒光呈色反應(yīng)，對(duì)組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行研究的技術(shù)。免疫組化檢測(cè)需要進(jìn)行固定，固定可防止細(xì)胞脫落，并盡量讓細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)維持和天然狀態(tài)下一致，確保組織細(xì)胞抗原特異性的穩(wěn)定。但化學(xué)物質(zhì)的固定使蛋白質(zhì)變性凝固，與天然狀態(tài)下的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)有一定的區(qū)別，但是又不同于WB中加熱變性變成線性的結(jié)構(gòu)。

免疫組化抗體識(shí)別的是未經(jīng)加熱變性處理的抗原表位，有些表位是線性的，而有的屬于構(gòu)象型；線性表位不受蛋白變性的影響，天然蛋白和變性后的蛋白都含有；構(gòu)象型表位由于受蛋白空間結(jié)構(gòu)限制，加熱變性會(huì)消失。因此在做IF/IHC實(shí)驗(yàn)中，最合適的抗體可以是用重組蛋白作為抗原制備的抗體，也可以是人工合成多肽作為抗原制備的抗體。如果所用的抗體識(shí)別的是蛋白上連續(xù)的幾個(gè)氨基酸，也就是線性表位，那么這種抗體可同時(shí)用于免疫組化和WB，而如果抗體識(shí)別的是構(gòu)象表位，則只能用于免疫組化。

三、IP/CHIP

免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）是利用抗原抗體特異性反應(yīng)純化富集樣品中目的蛋白的一種方法。通常使目標(biāo)蛋白同對(duì)應(yīng)抗體-protein A/G形成免疫復(fù)合物沉淀而得以收集。根據(jù)不同種類的檢測(cè)目標(biāo)，可以將IP技術(shù)分為：CHIP、RIP、Co-lP。IP富集蛋白，檢測(cè)與其結(jié)合的DNA的方法即為ChIP；檢測(cè)與其結(jié)合的RNA的方法即為RIP；檢測(cè)與其結(jié)合的蛋白的方法即為Co-IP。

免疫沉淀是用抗體去識(shí)別天然狀態(tài)下的蛋白質(zhì)，因此IP的抗體最好使用天然蛋白作為抗原制備的抗體，也可以用重組蛋白作為抗原制備的抗體。最好不要用人工合成多肽作為抗原制備的抗體，因?yàn)檫@種抗體識(shí)別的位點(diǎn)可能包裹在蛋白內(nèi)部而無法識(shí)別。CHIP和IP沒有太大的區(qū)別，唯yi的問題在于，如果抗體識(shí)別的抗原表位和該蛋白質(zhì)與DNA結(jié)合的部位一致，則會(huì)導(dǎo)致CHIP實(shí)驗(yàn)的失敗。

四、FC

流式細(xì)胞是以免疫熒光技術(shù)為基礎(chǔ)而發(fā)展起來的一種專門的細(xì)胞分析技術(shù)，主要用于細(xì)胞分析和分選。流式細(xì)胞中分為兩種，一種是活細(xì)胞的流式，這種流式最好采用天然蛋白作為抗原制備的抗體或者用重組蛋白作為抗原制備的抗體，另外一種是經(jīng)過固定之后的流式，和IF/IHC 所用抗體一致。

在流式細(xì)胞中，分為直接標(biāo)記和間接標(biāo)記，間接標(biāo)記不如直接標(biāo)記真實(shí)準(zhǔn)確。因此選擇流式抗體要采用帶有熒光標(biāo)記的一抗；如果研究的蛋白沒有直接標(biāo)記的一抗，那么就采用間接標(biāo)記抗體，需同時(shí)使用可識(shí)別靶標(biāo)抗原一抗和偶聯(lián)熒光染色的二抗。

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